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ISSN : 2287-7991(Print)
ISSN : 2287-8009(Online)
Journal of the Preventive Veterinary Medicine Vol.36 No.3 pp.131-142
DOI :

Determination of anthelmintic drug residues in milk using liquid chromatography with tandem mass spectrometry

Chae-Mi Lim, Myung-Sin Lim, Myeong-Ae Kim, Byung-Hoon Cho, Jeong-Woo Kang, Seong-Wan Son
Animal, Plant and Fisheries Quarantine and Inspection Agency
(Received September 04, 2012; Revised September 27, 2012; Accepted September 28, 2012)

Abstract

A liquid chromatographic-tandem mass spectrometric (LC-MS/MS) multi-residue method for simultaneous quantificationand identification of 37 anthelmintic veterinary drug residues (including benzimidazoles, macrocyclic lactones, andflukicides, levamisole, pyrantel and niclosamide) in milk has been developed and validated. For sample preparation, weused a simple modification of the QuEChERS (quick, easy, cheap, effective, rugged and safe) method, which was initiallydeveloped for analysis of pesticide residues. Anthelmintic residues were extracted into acetonitrile:methanol (9:1,v/v) using sodium chloride to induce liquid-liquid partitioning followed by dispersive solid phase extraction for cleanup.The extract was concentrated into dimethyl sulphoxide, which was used as a keeper to ensure that analytes remain insolution. Using rapid polarity switching in electrospray ionization, a single injection was capable of detecting both positivelyand negatively charged ions within a 15 min run time. The Limit of detection (LOD) and the Limit of quantification(LOQ) method ranged from 0.1 ng/g to 4.4 ng/g and from 0.3 ng/g to 14.6 ng/g, respectively. Validation ofthe developed method was based on international guidelines. Average recoveries ranged from 70% to 120%, except for54.7% at 0.5× MRL (rafoxanide) and 69.0% at 0.5× MRL (closantel). The coefficient of variation for the describedmethod was less than 15% over the range of concentrations studied. The result of the method was verified successfullyby participation in a proficiency study for analysis of anthelmintic drugs.

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서 론

벤지미다졸계 및 아버멕틴계를 비롯한 대부분의 구충제는 선충류 구충 목적으로 사용되나, praziquantel 등 일부 구충제는 조충류 및 흡충류를 구제하기 위하여 사용되며, 각종 과일과 채소의 항곰팡이 제제로도 널리 사용되고 있다. 현재 국내에서 사용되는 구충제는 벤지미다졸계 약물 163톤, piperazine 29톤, 아버멕틴계 약물 5.2톤, praziquantel 2.1톤, levamisole 2.1톤, pyrantel 1.6톤 그리고 miclosamide 0.4톤 등이 사용되고 있으며, 일부 구충제에서는 neurotoxicity [22], hyperplasia [12], goitrogenicity [21], 그리고 mutagenicity [27]와 같은 독성들이 보고된 바 있다. 이러한 독성을 지닌 구충제는 휴약 기간이 제품에 따라 다양하며, 특히 pyrantel의 경우 휴약 기간이 10주 정도로 장기간 설정되어 있어 축산물 내에 잔류 가능성이 높은 실정이다. 이와 같은 위해성 때문에 각 국가에서는 구충제에 대한 축산물의 잔류허용기준을 설정하여 규제하고 있으며, 우리나라에서도 식육뿐만 아니라 우유에서 albendazole, oxfendazole/fenbendazole/ febantel, oxibendazole, thiabendazole, abamectin, doramectin, ivermectin, eprinomectin에 대하여 잔류허용기준을 설정하여 관리하고 있다 [11].

우유 중에 잔류하는 구충제의 검사 방법에는 ELISA [4], surface plasmon resonance (SPR)-biosensor [8] 및 high performance liquid chromatography (HPLC) [5, 18, 25] 등을 이용한 방법들이 보고된 바 있으며, 이들 방법은 액상추출법으로 많은 양의 용매가 사용될 뿐만 아니라, solid-phase extraction (SPE) 카트리지를 이용한 시료 전처리법은 시간이 많이 소요되는 단점이 있어, 최근에는 고가의 자동화된 SPE platform을 소개하기도 했다 [28]. 또한 HPLC에 의한 분석법은 분석 물질의 머무름 시간과 분석 파장 스펙트럼을 이용하여 확인하기 때문에, 방해 물질(interference)과의 감별이 까다롭고, 잔류물질의 특이이온을 확인하기 어려운 문제점을 지니고 있다. 이러한 문제점들을 극복하기 위하여 미국이나 EU 등 각국에서는 분석 물질의 특이이온 확인이 가능한 liquid chromatography with tandem mass spectrometry (LC-MS/MS)를 이용한 분석법 개발을 확대해 나가고 있는 추세이며 [1, 3, 7, 9, 26, 31], 국내에서도 LC-MS/MS를 이용하여 테트라사이클린계 항생 물질 [14], 페니실린계 항생물질 [15], 설파제 [16], 퀴놀론계 [17]에 대한 잔류 분석법을 보고한 바 있다. 미국은 ivermectin, doramectin, moxidectin에 대하여 공정시험법으로 LC-MS 동시 분석법을 정하고 있으며, 일본은 eprinomectin, clorsulon, thiabendazole, flubendazole, mebendazole, nitroxynil, morantel, levamisole 등의 구충제에 대하여 HPLC과 LC-MS법을 동시 적용하고 있다. 그러나 국내에서는 levamisole과 closantel 등의 구충제에 대하여 LC-MS을 이용한 잔류시험법은 있으나, 정성․정량을 위한 특이이온이 명시되어 있지 않는 문제점이 존재하고, closulon, morantel, nitroxynil, oxyclosanide 등 일부 구충제에 대해서는 국내 잔류허용기준과 공정시험법이 없는 실정이다. 따라서, 잔류허용기준 설정을 위한 구충제 각 계열별 약물과의 동시분석을 위한 정성, 정량법의 개발이 필요한 실정이다. 

여러 계열의 구충제를 동시에 분석하기 위해서는 시료 전처리과정이 무엇보다 중요하며, 각 전처리 단계에서 분석 물질의 손실을 최소화하는 것이 필요하다. 최근 동시 다계열 농약을 100여종 이상 검출할 수 있는 방법으로 QuEChERS(quick, easy, cheap, effective, rugged and safe) 방법을 이용한 시료 정제 방법이 많이 보고되고 있다 [13, 20, 23]. QuEChERS method는 시료에 존재하고 있는 물, 단백질 그리고 지방 같은 것을 쉽고 빠르게 제거해 줌으로써 분석 물질의 추출이 가능하고, 높은 회수율을 얻어 낼 수 있는 것으로 알려져 농약뿐만 아니라 동물용의약품의 동시 다계열 분석에도 많이 사용되고 있다 [8, 10, 30]. 그러나 아직까지 구충제 동시 다계열 분석을 위한 최적의 시료 전처리법 확립에 대한 연구는 많이 미흡한 실정이다. 따라서, 본 연구에서는 QuEChERS 방법을 이용하여 우유 내 구충제 동시 다계열 분석을 위한 간편하고 신속한 시료 전처리법을 확립하고, 잔류물질의 특이이온과 이온 간의 ion ratio을 통하여 물질의 정성․정량이 가능한 LC-MS/MS를 이용하여 우유에서 37종의 구충제를 대상으로 잔류 분석법을 개발하고자 하였다. 

재료 및 방법

1. 표준품 및 시약

구충제37종에대한표준물질은moxidectin (MOXI) (Bayer Co), abamectin (ABA) (Fluka Co), bithionol (BITH), emamectin (EMA), doramectin (DORA), eprinomectin (EPR), 2-amino-flubendazole (FLU-NH2), morantel (MOR), niclozamide (NICL), pyrantel (PYR), chlorfluazuron (CHLO) (Riedel-deHaen Co), febantel (FEB), fluazuron (FLUZ), clorsulon (CLOR), 5-OH-mebendazole (5-OH-MBZ) (Sigma-Aldrich Co), ivermectin (IVER), oxibendazole (OXI), ricobendazole (RICO), 5-OH-thiabendazole (5-OH-TBZ), alendazole sulfone (ALB-SO2) (Toronto Research Chemicals Co), amino albendazole sulphone (ABZ-NH2-SO2), albendazole (ALB) (USP), fenbendazole (FBZ), levamisole (LEVA), mebendazole (MBZ), oxfendazole (OFZ), thiabendazole (TBZ), triclabendazole (TCB), praziquantel (PRAZ), closantel (CLOS) (Wako Pure Chemical Co), flubendazole (FLU), keto-triclabendazole (keto-TCB), oxfendazole sulfone (OFZSO2), oxyclozanide (OXY), rafoxanide (RAF), nitroxynil (NITR), mebemdazole-amino (MBZ-NH2) (Witega Laboratories Berlin-Aldershof GmbH)를 사용하였고, 내부표준물질로는 fenbendazole-D3 (FBZ-D3) (Fluka Co), flubendazole-D3 (FLU-D3), 5-OH-mebendazole-D3 (5-OH-MBZ-D3), oxibendazole-D7 (OXI-D7), selamectin (SELA), febantel-D7 (FEB-D7) (Sigma-Aldrich Co), salicylanilide, thiabendazole-D4 (TBZ-D4) (Toronto Research Chemicals Co), Albendazole-D3 (ALB-D3) (Witega Laboratories Berlin-Aldershof GmbH))의 총 9가지를 사용하였다. 구충제 추출과정 시에 이용되는 clean-up kit는 Agilent사 QuEChERS (Dispersive 15 ㎖, Fruits And VEG, EN, W/C)을사용하였다. 구충제의 추출과 분석에 이용되는 ethyl acetate, acetonitrile, 그리고 methanol은 추가 정제과정이 필요없는 특급 HPLC용을 사용하였고, 증류수는 18.3Ω (Milli-Q-System) 이상의 3차 증류수를 사용하였다. 그리고 이동상 제조에 필요한 ammonium formate, formic acid은 특급시약을 사용하였다.

2. 분석기기 및 분석조건

분석기기는 LC-MS/MS (Agilent 6410 QQQ, USA)를 이용하였으며, LC-MS/MS를 이용한 구충제의 동시 분석 조건으로 칼럼은 Agilent Eclipse plus C18 column (2.1×100 ㎜, 1.8 ㎛ particle size)을 사용하였고, 이동상 용매는 20 mM ammonium formate와 0.1 % formic acid가 포함된 증류수와 0.2% formic acid가 포함된 methanol의 시간대별 비율을 조절하는 gradient program을 사용하였고, 유속은 0.25 ㎖/min으로 흘려주면서 2 ㎕를 주입하여 분석하였다(Table 1). 최적의 MS/MS 조건은 확인․정량을 위한 분석 이온으로 각 물질별로 precursor ion을 선발하였으며, 각 precursor ion에서 파생되는 각 2개의 product ion을 선발하여 multiple reaction monitoring (MRM)으로 분석하였다. Product ion의 2개의 이온 중 하나는 정량이온으로 하였고, 다른 하나는 확인이온으로 분석하였다 (Table 2). MS/MS 조건은 electrospray ionization (ESI) positive/negative ion switching mode로 capillary +4.0/4.0 kV, desolovation gas 온도는 350℃, gas flow는 10 ℓ/min, nebulizer는 45 psi로 하였다.

Table 1. Mobile phase gradient program of anthelmintic drugs

Table 2. Multiple reaction monitoring (MRM) parameters of anthelmintic drugs by LC-MS/MS

3. 표준용액 조제

표준용액은 구충제 37종과 내부표준물질 9종에 대한 표준품을 각각 10 ㎎씩 정확히 정량하여 10 ㎖ 용량 플라스크에 취하여 methanol (MeOH), acetonitrile (ACN), dimethyl sulfoxide (DMSO) 등을 사용하여 표지선까지 채워 1,000 ㎍/㎖이 되도록 만든 후 소량으로 나누어 냉동 보관하면서 사용하였다. 

4. 표준검량선 작성

잔류허용기준을 기준으로 하여 각 물질별로 validation level (VL)을 정하였으며, 각 물질의 대사물질은 원물질과 같은 농도로, 잔류허용기준이 없는 구충제는 일괄적용기준인 30 ng/g으로 하여 VL을 설정하였다. Blank를 포함하여 각 물질별 VL 농도의 0, 0.25×, 0.5×, 1×, 2×, 4×의 6단계로 시료표준곡선(matrix standard curve)를 작성하였다. 

5. 시료 전처리법

우유를 균질화한 후 2 g을 50 ㎖ 원심분리관에 담아 내부 표준물질 혼합표준용액을 각각 첨가하였다. 각각의 시료를 15초 동안 혼합한 후 sodium chloride 1 g을 넣고 균질화한 후 물 2 ㎖를 넣고 1분간 균질화하였다. 여기에 ACN:MeOH (9:1, v/v) 혼합액 10 ㎖를 넣고 15분간 강하게 균질화한 후, 4,500 r/min에서 10 분간 원심분리한 후 상층액을 취하였다. 상층액을 MgSO4 900 ㎎, primary secondary amine (PSA) 150 ㎎을 포함하고 있는 15 ㎖ 원심분리관에 옮긴 후 30초간 강하게 균질화한 후 4,500 r/min에서 10분간 원심분리하였다. 상층액을 유리튜브에 옮긴 후 50℃, 질소가스 하에서 감압 농축한 후 500 ㎕의 DMSO로 녹인 후 0.2 ㎛ syringe filter로 여과하여 분석에 이용하였다. 

6. 분석법 검증

분석법 검증을 위하여 우유의 음성대조시료에 37종 구충제 표준용액 혼합액을 이용하여 VL 농도의 0.5×, 1×, 2×가 되도록 첨가하여 blank 시료와 함께 각각 균일한 농도로 섞어서 조제하였다. 각각의 농도별로 6개 이상의 첨가 시료(spiked sample)를 만들어 정확성과 정밀도를 확인하였다. 검출한계(LOD)와 정량한계(LOQ)는 일반적인 분석의 권장 기준에 따라 LOD는 signal/noise≥3의 농도로, LOQ는 signal/noise≥10의 농도로 설정하였다. 

결과 및 고찰

1. LC-MS/MS 분석조건 확립

LC-MS/MS 분석 조건에서 벤지미다졸계 구충제와 아버멕틴계 구충제는 이동상에 특정 유기 용매를 첨가함으로써 여러 구충제를 효과적으로 분리할 수 있다고 보고된 바 있다. 가령, formic acid 농도를 0.1 %로 하였을 때 벤지미다졸계 구충제의 검출 감도가 향상되었으며 [6], 아버멕틴계 구충제의 경우 acetic acid와 ammonium acetate를 이동상에 첨가하여 검출 감도가 좋아지는 것이 보고되기도 하였다 [26]. Kinsella 등의 연구에서도 아버멕틴계 구충제 분석 시 ammonium formate을 이동상에 첨가시킬 경우, 용매의 용해성을 향상시키기 때문에 검출 감도를 높일 수 있으나, 산성 성분을 이동상에 첨가할 경우, 나트륨 부가물의 형성으로 인하여 아버멕틴계 약물에는 적당하지 않은 것으로 보고하였다 [9]. 본 연구에서도 구충제의 이동상으로 formic acid를 사용했을 때 아버멕틴계 약물의 감도가 낮았으나, ammonium formate를 사용한 결과, 구충제 전체적으로 분리능과 감도가 향상됨을 확인할 수 있었다. 따라서 본 연구에서 이동상 조건은 20 mM ammonium formate와 0.1% formic acid 포함한 증류수와 0.2% formic acid를 포함한 methanol의 시간대 비율을 조절하는 gradient program을 사용하여 37종의 구충제 동시분석을 위한 최적의 이동상 조건 확립을 하였고, 이동상 용매의 시간대 조절을 통해 머무름 시간을 달리함으로써 각각의 구충제 물질을 효과적으로 분리할 수 있었다 (Fig. 1). 

Fig. 1. Mass chromatograms of 37 anthelmintic drugs.

최근 짧은 run time을 이용하여 분석 물질의 분리능을 높이는 방법들이 보고된 바 있다 [10]. sub-2 ㎛ particles를 이용하거나, 높은 압력의 LC pump를 사용하여 높은 선속도를 이용하여 peak capacity을 향상시킬 수 있거나 [24], 빠른 scanning mass spectrometers가 발달됨으로써 12~15의 data point를 이용하여 동시 다계열 분석이 가능해졌다 [2]. 또한 최근 LC-MS/MS의 기술이 발전함에 따라 single injection을 통하여 빠른 polarity switching이 가능해짐으로써 positive와 negative mode를 동시에 분석할 수 있게 되었다[30]. 따라서 본 연구에서도 1.8 ㎛ particle size를 지닌 C18 column (2.1×100 ㎜)을 사용하여 물질별 분리능 향상 및 분석시간을 단축시켰으며, LC-MS/MS를 이용하여 positive와 negative modes가 전환하도록 실시하여 single injection으로 37종 구충제 모두 최적의 분리능을 보이도록 하였다. 결과적으로 single injections으로서 각각의 시료에서 30종의 구충제를 ESI positive mode와 7종의 구충제를 ESI negative mode로 동시 측정할 수 있었고, 37종 구충제가 모두 15분 안에 분리되었다. 

2. 시료 전처리법 확립

37종 구충제 동시 분석 개발에 중요한 과정으로는 시료 전처리 과정으로써 각 전처리 단계에서 분석 물질의 손실을 최소화하는 것이 무엇보다 중요하며, 분석 물질의 회수율은 이러한 과정에서 추출에 사용되는 유기용매 등에 의해 영향을 받을 수 있다. QuEChERS 방법은 동시 다계열 물질을 검출해 내는데 있어 성공적인 방법으로 입증되어 왔다 [8, 19, 20, 24]. QuEChERS 방법은 시료 내 잔존하고 있는 물, 단백질 그리고 지방 같은 것을 제거해 줌으로써 쉽고 빠른 추출이 가능하고 높은 회수율을 얻어 낼 수 있으며, ACN에 NaCl을 첨가해 줌으로써 물로부터 분리가 가능하며, 적은 양의 지방도 추출이 가능하여 기존의 SPE보다 쉽고 빠르게 분석 물질을 추출할 수 있는 장점을 가지고 있다. 그러나 아버멕틴계 구충제 분석에서는 QuEChERS 방법이 우유에서 HPLC fluorescence 방법보다 낮은 감도를 나타내는 문제점이 있으며 아직까지도 계열별 구충제 동시분석을 위한 최적의 시료 전처리 과정 개발은 연구가 많이 미흡한 실정이라서 본 연구에서는 QuEChERS 방법을 적용하되, 시료 균질화를 위한 buffer pH test, 유기용매별 추출효율시험 및 QuEChERS 방법에서 사용되는 매질, 즉, C18과 PSA에 대한 정제 효율에 대하여 비교실험을 각각 실시하였다. 

Boscher 등은 테트라사이클린 계열의 항생제 분석을 위하여 추출과정에서 0.5M EDTA-Na2이 포함된 McIlvaine buffer (pH=4.6)를 사용시 높은 회수율을 얻을 수 있는 것으로 보고한 바 있다 [3]. 따라서 본 연구에서도 우유에 포함된 방해 물질로 작용할 수 있는 물질 중 단백질을 효과적으로 제거할 수 있을 것으로 판단되는 McIlvaine buffer을 pH별로 조제하여 시료 균질화를 위한 전처리 과정에 이용하였다. MaIlvaine buffer의 pH (pH 3과 pH 5), 증류수 (pH 7)등 3가지 용매를 이용하여 우유 시료 2 g과 혼합하여 균질화한 후 평균 회수율을 분석하였다. Fig. 2에서와 같이, oxyclozanide를 제외하고 대부분의 구충제는 pH 7인 증류수에서 높은 회수율을 나타냈다. 따라서 항생제 분석을 위해 사용되었던 McIlvaine buffer의 경우, 우유에서 구충제 분석을 위한 시료 균질화를 위한 전처리 방법으로는 효과적이지 않으며, 오히려 증류수가 시료 균질화 효율이 높은 것으로 나타났다.

Fig. 2 Comparing with different pH buffer test.

우유는 여러 가지 영양 물질을 함유하고 있어서 LC-MS/MS로 잔류물질을 분석 시 방해 물질이 많이 검출되어 분석에 영향을 미칠 수 있으며, 이들 물질은 ACN이나 acetone와 같은 유기용매를 처리해 줌으로써 효과적으로 제거할 수 있다. 따라서, 본 연구에서도 우유에서 여러 가지 유기용매를 사용하여 추출 용매를 평가하는 실험을 수행하였다. ACN, ACN:MeOH (9:1, v/v) 혼합액, 기존에 Lim 등 [18]이 벤지미다졸계 구충제 분석에서 사용하였던 ethyl acetate 등 3가지 용매를 사용하여 추출 효율을 비교하였다. Fig. 3에서 보듯 ACN:MeOH (9:1, v/v) 혼합 추출 용매를 사용하였을 때 대체적으로 좋은 회수율을 나타냈으나, 5-OH-thiabendazole, oxibendazole, eprinomectin 등에서 낮은 평균 회수율을 나타냈다. 반면, ethyl acetate 용매는 전체적으로 낮은 회수율을 나타내 구충제 추출을 위한 용매로는 적절하지 않은 것으로 판단되었다. 

Fig. 3 The results of different extraction solutions in the QuEChERS procedure for milk.

마지막으로 정제 단계에서는 방해 물질이 추출 과정 동안에 함께 추출되어 분석 컬럼의 수명을 줄일 수 있는 문제점이 있기 때문에, 방해 물질을 효과적으로 제거하는 것이 정제 단계의 핵심이라 할 수 있다. 원래 QuEChERS 방법에서 사용되는 PSA는 시료에서 fatty acid를 효과적으로 제거해 줌으로써, 시료의 회수율을 높일 수 있는 것으로 알려져 있고, C18을 첨가 시 positive mode에서 좋은 회수율을 보이는 것으로 보고되었다 [9]. 따라서 본 연구에서는 QuEChERS방법을 이용하여 C18을 첨가한 것과 첨가하지 않은 clean-up test를 실시하여 회수율을 분석하였다. 그 결과, negative mode에서 closantel, nitroxynil, oxyclosanide, keto-triclabendazole, clorsulon의 구충제는 C18 첨가 시 회수율이 현저히 감소되는 것으로 나타났고, 아버멕틴계 구충제들도 벤지미다졸계 구충제보다 C18을 첨가 시 회수율이 현저히 떨어지는 것으로 나타나, 우유에서 C18을 PSA와 함께 처리 시 negative mode에서 정제 능력을 감소시킬 수 있는 것으로 판단되었다 (Fig. 4). 따라서, 본 연구에서 37종 구충제 동시분석을 위하여 대부분의 구충제에서 좋은 회수율을 얻고자 PSA와 MgSO4를 포함하는 QuEChERS kit를 사용하여 시료전처리법을 확립하였다.

Fig. 4 Comparison of different sorbents in QuEChERS clean up test for milk.

3. 분석법 검증

본 연구의 정확한 검증을 위하여 표준곡선, 정확도, 정밀도, 검출한계, 정량한계를 각각 조사하였다. 잔류허용기준을 기준으로 하여 각 물질별로 validation level (VL)을 정하고, blank를 포함하여 각 물질별 VL 농도의 0, 0.25×, 0.5×, 1×, 2×, 4×의 6단계로 시료표준곡선 (matrix standard curve)를 작성한 결과, nitroxynil 0.988을 제외한 다른 구충제 물질대부분에서 직선성은 0.99 이상으로 나타나 매우 양호한 직선성을 보였으며, 이는 Codex에서 권장하는 r2=0.98와 비교하여 매우 만족할만한 수준이었다. 37종 구충제에 대한 검출한계와 정량한계는 신호 대 잡음비가 각각 3, 10인 값으로 하여 측정한 결과, 0.1~14.6 ㎍/㎏ 수준으로 잔류허용기준 이하로 정량이 가능한 것으로 나타났다 (Table 3).

Table 3. MRL, linearity, LOD, and LOQ of anthelmintic drugs in spiked milks (n=6)

정확도 회수율로부터 확인할 수 있는데, 국제적으로 권장되는 회수율은 70~120% 범위를 충족하여야 한다. Table 4에서 보는 바와 같이 rafoxanide와 closantel는 각각 0.5×의 MRL 농도에서 54.7%와 69%의 비교적 낮은 회수율로 Codex 권장기준에 다소 미흡한 결과를 나타내었으나, 대부분의 분석 물질에 대한 평균 회수율은 70~120%로 권장기준을 충족하는 것으로 나타났다. 또한, 반복정밀도를 나타내는 변이계수는 37종 구충제 모두 15% 이하로서 Codex 권장 기준 20% 이내로서 양호한 수준이었다. 

Table 4. Recovery rates and coefficient of variation of anthelmintic drugs in spiked milks (n=6)

Wang 등의 Ultra high performance liquid chromatography coupled to triple quadrupole tandem mass spectrometry (UPLC-MS/MS) positive mode에서 분석한 4종의 아버맥틴계 물질에 대한 정량 한계를 0.33~2.27 ㎍/㎏으로 보고하였고 [29], 본 연구의 정량한계보다 낮은 수치로 나타났는데, 이는 negative mode와 positive mode의 차이로 사료된다. 본 연구에서 사용한 negative mode보다는 positive mode에서 신호 대 잡음비 (signal to noise ratio)가 훨씬 더 크기 때문에, 더 낮은 농도까지 정량할 수 있기 때문으로 여겨진다. 반면에 Lopes 등은 UPLC-MS/MS positive mode에서 분석한 20종 농약 중 아버맥틴계와 벤지미다졸계 구충제 7종에 대한 정량한계를 10.0~30.0 ㎍/㎏으로 보고하였고[19], 본 연구의 정량한계보다 매우 높은 수치로 나타났는데, 이는 전처리법 차이로 여겨진다. 즉, 본 연구에서 QuEChERS방법에서 전처리 과정마다 최적 조건을 성립하여 분석한 방법으로 일정 정도 영향을 끼친 것으로 사료된다.

결론적으로 LC-MS/MS를 이용하여 우유에 잔류된 37종의 구충제를 동시에 정성․정량이 가능할 수 있는 고감도 잔류분석법을 확립하였으며, 확립된 잔류 분석법으로 국내에 유통되고 있는 우유에 대한 잔류 실태를 보다 효율적으로 모니터링할 수 있을 뿐만 아니라, 잔류 분석 결과의 신뢰성을 높일 수 있을 것으로 기대된다. 

감사의 글

본 연구는 농림수산검역검사본부 수의과학기술개발연구사업 (과제코드 : B-FS09-2010-10-01)의 지원에 의해 수행되었습니다. 

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